体外哺乳动物细胞染色体畸变试验(CA)迎重大修订！

导读

2026年5月29日，国家药监局发布2026年第51号公告，将《体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法》等8项检验方法纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自2027年3月1日起正式实施。这是该试验方法自2015年版规范实施以来的重大修订。

体外哺乳动物细胞染色体畸变试验是评价化妆品原料及产品致突变性的核心方法之一，属于动物试验替代方法的重要组成部分。本次修订在试验标准、结果记录、毒性评估等方面均有实质性升级，将对化妆品检验检测行业产生深远影响。本文将为您逐条梳理新旧版本的关键变化，助您提前布局、从容应对。

一、修订背景与法规依据

根据国家药监局公告（2026年第51号），本次修订的8项方法替换原2015年版方法（详见下图）：

实施时间：新方法自2027年3月1日起强制实施，鼓励相关单位提前采用。

适用范围：化妆品注册和备案相关检验，自实施之日起需按照新规执行。

二、新旧版本核心变化总览

总结：新版方法在统计效力、结果精准度、数据可溯源性三大维度实现了全面升级。

※变化1：分析细胞数量大幅提升，统计效力显著增强

变化解读：分析细胞数量从差异化标准（100/200个）统一提升至300个，显著增强了试验结果的统计效力，减少了抽样误差。同时保留了阳性结果时灵活调整的空间，兼顾了试验效率。

※变化2：裂隙与畸变分离处理，有效避免假阳性

新版方法明确要求：

· 裂隙（chromatid gap）单独记录和报告

· 裂隙 不计入总畸变频率

操作流程图

变化解读：结果记录从“粗放式"走向“精细化"，裂隙与畸变分离处理有助于避免假阳性误判，对畸变亚型的分类记录则便于数据溯源和实验室间比对。

※变化3：细胞毒性指标明确定义，与国际标准全面接轨

新版方法在规范性方面更为严谨，明确规定：

 · 不建议采用处理组细胞数量与对照组细胞数量比值（RCC）作为细胞毒性指标（因为RCC无法反映细胞增殖动力学的变化，敏感度不足。）

· 应采用相对细胞增长数（RICC） 或相对群体倍增数（RPD） ，或原代培养淋巴细胞的有丝分裂指数（MI）（在活化系统存在或不存在两种条件下确定细胞毒性）

标准对接

这一调整与OECD 473指导原则（经济合作与发展组织体外哺乳动物细胞染色体畸变试验指南）一致，实现了中国标准与国际通行标准的全面接轨，对于化妆品出口企业的数据国际认可具有积极意义。

三、新旧版本全文逐条对照分析

为方便检验检测机构和技术人员全面掌握修订细节，以下对新旧版本全文进行逐条对照分析：

1. 范围与试验目的——无实质性变化

新旧版本在"范围"和"试验目的"条款中内容基本一致，均明确了本方法适用于评价化妆品原料及其产品的致突变性，检测培养的哺乳动物细胞染色体畸变。

2. 定义——新增术语解释

新版补充了"有丝分裂指数"（mitotic index）的定义，即中期相细胞数与所观察细胞总数之比值，是一项反映细胞增殖程度的指标。该术语在新版中被列为细胞毒性的核心指标之一。

3. 试验基本原则——无实质性变化

新旧版本均强调在加入和不加入代谢活化系统条件下试验，使用中期分裂相阻断剂处理细胞。新版同样指出，虽然多倍体增加可能预示数目畸变，但本方法并不适合用于测定染色体数目畸变。

4. 试剂和受试物制备——新增"空白对照"要求

旧版：仅规定设阴性对照（溶剂对照）

新版：增加了空白对照要求——如未能证实所选溶剂不具有致突变性，溶剂对照与本实验室空白对照背景资料有明显差异，还应设空白对照。

解读：这一调整加强了对溶剂背景干扰的控制，确保阴性对照结果的可靠性。

5. 受试物最高浓度设置——大幅修订

这是本次修订变化显著的条款之一，新旧版本对比如下：

6. 活化系统——文字表述微调

旧版规定S9使用浓度为1%～10%（终浓度），新版将其明确为使用浓度为1%～10%（终浓度），并补充可使用经活力确认的商品化S9。核心配制方法未变。

7. 试验步骤——分析细胞数量调整

新版主要修订内容：

· 细胞系选择：新增TK6细胞系，并增加"所用细胞系的选择应具有科学依据"的要求

· 细胞培养：补充"当难以得出明确结论时，应更换试验条件重复试验"的指导

· 分析细胞数：旧版为100/200个，新版统一提升至300个

8. 试验结果与统计处理——新增精细化要求

新版在"试验结果"条款中增加了大量细化要求：

· 要求按亚型（断裂、交换）分类列明畸变数量

· 裂隙需单独报告，不计入总畸变频率

· 多倍体和核内复制细胞需报告百分比

· 需记录所有处理组及对照的同步细胞毒性测定数据

统计处理方法未变，仍为χ²检验、Fisher精确概率检验等。

四、关键实施时间节点

鼓励提前采用

相关检测机构可提前完成方法验证和过渡

五、行业影响与应对建议

——对检验检测机构

方法验证：建议在2027年3月前完成新方法的方法学验证，特别是确认分析300个中期分裂相细胞的操作流程和质控标准。

人员培训：针对新版的精细化记录要求（裂隙单独记录、亚型分类、多倍体百分比报告等），需对技术人员进行专项培训，确保数据记录的规范性和一致性。

SOP修订：根据新版要求修订实验室标准操作规程，重点关注分析细胞数量、细胞毒性指标选择（RICC/RPD/MI）、同步数据记录等方面的更新。

试剂与质控：确保S9活化系统活性符合要求（能明显活化阳性对照物），可考虑使用商品化S9以简化质控流程。

——对化妆品企业

检验计划调整：2027年3月1日后提交的注册备案检验，须采用新版方法。企业应合理安排检验时间节点，预留充足缓冲期。

预算评估：分析细胞数量从100/200个增至300个，可能带来检验成本和周期的适度增加，建议提前与检测机构沟通确认最新报价和周期。

数据可比性增强：新版方法与国际标准全面接轨，检验数据在国际市场的认可度将显著提升，有利于企业的国际化布局。

关注配套方法：本次公告共纳入8项方法，除染色体畸变试验外，还包括细菌回复突变等配套方法，企业应对全套方法变更进行系统了解。

六、总结：三大升级亮点

七、附录：新旧版本主要差异速查表

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免责声明：本文基于国家药监局2026年第51号公告及附件内容撰写，仅供参考。具体实施以正式文件为准。

参考文献

[1]  国家药监局. 关于将《化妆品中三价铬和六价铬的检验方法》等8项方法纳入化妆品安全技术规范的公告（2026年第51号）. 2026-05-29.

[2] 中检院. 《体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法》对作染色体分析的细胞数进行了哪些调整以及为什么增加实验结果分析？2026.

[3] 妆合规. 《体外哺乳动物细胞染色体畸变试验方法》修订方法纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》. 2026-06-02.

[4] OECD. Test No. 473: In Vitro Mammalian Chromosomal Aberration Test. OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, 2016.