一文与您分享ERα36抗体的制备方法

　　在肿瘤生物学与分子病理学研究环节中，ERα36抗体是特异性识别雌激素受体α36亚型的核心试剂，试剂整体的检测灵敏度与信号特异性，依靠多克隆免疫球蛋白与严谨实验条件的精准配合，各结构组分具备专属功能特性，共同保障ERα36抗体高效完成各类复杂样本下的免疫印迹(WB)与酶联免疫吸附(ELISA)检测作业。
 

　　1、样本制备与蛋白提取
 

　　将细胞或组织样本在冰上裂解，使用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液提取总蛋白。提取过程中需保持低温操作，防止蛋白降解。提取完成后，使用BCA法测定蛋白浓度，并加入上样缓冲液煮沸变性，分装保存于-80℃冰箱备用。
 

　　2、SDS-PAGE电泳与转膜
 

　　根据目标蛋白ERα36的分子量(约36kDa)，配制适宜浓度的分离胶(如10%或12%)。将处理好的蛋白样品上样进行电泳分离，随后通过湿转法将蛋白转移至PVDF膜或NC膜上。转膜结束后，使用5%脱脂奶粉或BSA封闭液在室温下封闭1小时，以阻断非特异性结合位点。
 

　　3、一抗孵育与浓度优化
 

　　将ERα36抗体(货号Hz-R23769)用抗体稀释液进行稀释。在WesternBlot实验中，建议起始稀释比例为1:500至1:2000；在ELISA实验中，建议稀释比例为1:5000至1:10000。将稀释后的一抗与膜或酶标板在4℃环境下孵育过夜，以确保抗体与抗原充分结合。
 

　　4、二抗孵育与信号检测
 

　　回收一抗后，使用TBST缓冲液洗涤膜3次，每次10分钟。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的相应二抗，在室温下孵育1小时。再次洗涤后，加入ECL化学发光底物，利用化学发光成像系统采集图像。若背景过高，可适当增加洗涤次数或延长洗涤时间。
 

　　5、规范储存与注意事项
 

　　抗体收到后应短暂离心，分装保存于-20℃，避免反复冻融导致效价降低。该抗体为兔源多克隆抗体，亚型为IgG，仅供科研使用。实验过程中需佩戴手套，避免直接接触皮肤，并严格按照生物安全规范处理废弃试剂。