肝星状细胞培养试剂盒实现细胞的高效活化与稳定扩增

　　肝星状细胞在肝脏纤维化、再生及代谢研究中扮演着核心角色。为简化原代细胞分离与培养流程，肝星状细胞培养试剂盒应运而生，集成了消化液、分离液、培养基及辅助试剂，显著提升实验效率与成功率。然而，其效能的发挥高度依赖于严谨的操作规范。掌握以下正确使用方法，方能点燃科研的“星”火，实现细胞的高效活化与稳定扩增。
 

　　一、预实验准备：细节决定成败

　　使用前请仔细阅读说明书，确认试剂盒内各组分齐全且在有效期内。所有试剂需提前置于冰上预冷（除培养基可室温平衡），离心机、水浴锅、CO2培养箱等设备提前调试至工作状态。实验人员需穿戴无菌服、手套、口罩，操作在生物安全柜内完成，严防污染。

　　二、组织处理与消化：精准“解构”肝脏

　　取新鲜肝脏组织后，迅速置于预冷PBS中清洗血污。使用剪刀或组织研磨器将组织剪碎至1mm2左右小块。加入适量预冷的Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴振荡消化20-40分钟，期间可轻柔吹打促进分散。消化时间需根据组织类型和批次优化，避免过度消化损伤细胞。

　　三、密度梯度离心：高效“提纯”星状细胞

　　将消化液过滤、离心后，弃上清，细胞沉淀重悬于试剂盒提供的密度梯度液中。进行梯度离心（如1400×g，15分钟，4℃），肝星状细胞因富含脂滴而漂浮于特定界面。小心吸取白色乳糜层即为目标细胞。

　　四、接种与培养：营造“舒适”微环境

　　收集的细胞用培养基（含血清及生长因子）洗涤后，接种于预先涂有胶原或明胶的培养瓶中，置于37℃、5%CO2培养箱。前48小时避免换液，以促进细胞贴壁。后续每2-3天更换新鲜培养基，观察细胞形态（静息期呈圆形发亮，活化后呈梭形或肌成纤维样）。

　　五、定期传代与状态监测

　　细胞融合度达80%-90%时，可用低浓度胰酶消化传代。建议使用原代细胞前3代，以保证生物学特性稳定。定期通过免疫荧光（如GFAP、Desmin染色）或油红O染色验证细胞纯度与脂滴含量。